L'hybridation in situ est une méthode de détection des aberrations chromosomiques. Il s'agit d'un étiquetage spécifique chromosomes avec fluorescent teintures et les lier à une sonde d'ADN. Cette technique est utilisée pour le diagnostic prénatal des mutations génétiques.
Qu'est-ce que l'hybridation in situ?
L'hybridation in situ implique un marquage spécifique chromosomes avec fluorescent teintures et les lier à une sonde d'ADN. Cette technique est utilisée pour le diagnostic prénatal de gène mutations. Hybridation in situ ou hybridation in situ par fluorescence implique la détection génétique moléculaire de acides nucléiques à partir d'ARN ou d'ADN dans des tissus spécifiques ou une cellule. Normalement, ce type de diagnostic est utilisé pour détecter une anomalie chromosomique structurelle ou numérique grossesse. A cet effet, une sonde produite artificiellement est utilisée, elle-même constituée d'acide nucléique. Il se lie ensuite au acides nucléiques dans l'organisme par appariement de bases. Cette liaison est désignée par le terme d'hybridation. La détection est réalisée sur la structure vivante du patient et correspond donc à une détection in situ. Il faut en distinguer les méthodes in vitro, dans lesquelles la détection a lieu dans l'éprouvette. La méthode a été développée au 20ème siècle par les scientifiques Joe Gall et Mary Lou Pardue. La technique a évolué depuis. Par exemple, alors que des sondes radioactives étaient alors utilisées, des sondes marquées à la fluoroscence avec une liaison covalente au marquage molécules sont utilisés aujourd'hui.
Fonction, effet et cibles
L'hybridation in situ est généralement utilisée pour détecter des aberrations chromosomiques, des anomalies chromosomiques qui ne peuvent pas être détectées dans un caryogramme. Ainsi, la méthode est toujours utilisée lorsque des maladies héréditaires doivent être déterminées au cours de grossesse. Les aberrations chromosomiques étant un problème qu'il ne faut pas sous-estimer aujourd'hui, l'application de la méthode s'est accrue au fil du temps. L'hybridation est réalisée à l'aide de cellules natives de la mère le liquide amniotique. La base de la technique est la liaison de la sonde marquée par la couleur à des fragments d'ADN. Grâce à la reliure, un microscope peut ensuite être utilisé pour évaluer le nombre de copies, car les copies individuelles émettent un signal lumineux et peuvent ainsi être rendues visibles au microscope. Il existe différentes procédures pour cela. Soit l'analyse a lieu immédiatement après la liaison. Dans ce cas, un colorant fluoroscence tel que biotine est utilisé, qui est lié directement à la sonde d'ADN. Dans la méthode indirecte d'hybridation in situ, l'analyse ne peut pas être effectuée immédiatement après l'hybridation car les substances fluorescentes ne peuvent se lier à la sonde qu'après l'hybridation. Cette méthode indirecte est plus couramment utilisée que la méthode directe car elle est considérée comme plus sensible. Les techniques comprennent des sondes d'ADN centrométriques spécifiques d'un chromosome, des sondes d'ADN spécifiques d'un locus, des sondes de banques d'ADN spécifiques d'un chromosome et des hybridations génomiques comparatives. Des sondes d'ADN centromères spécifiques aux chromosomes peuvent être utilisées pour détecter des anomalies numériques chromosomiques. Autrement dit, ils sont principalement utilisés lorsqu'ils sont dupliqués ou supprimés chromosomes sont suspectés. Les sondes ADN spécifiques au locus sont principalement adaptées à la détection de mutations minimales qui ne peuvent pas être détectées dans le caryogramme. Une sonde de bibliothèque d'ADN chromosomique est notamment utilisée pour détecter des insertions et des translocations. L'hybridation comparative du génome, en revanche, est une analyse complète des pertes et des gains dans le matériel chromosomique. Aujourd'hui, l'hybridation in situ est d'une grande importance dans le diagnostic de diverses mutations chromosomiques. Dans le diagnostic de Le syndrome de Down, par exemple, les sondes se lient au chromosome 21. A cette fin, des sondes spécifiques du chromosome sont généralement utilisées, qui peuvent être appliquées en cas de suspicion de cette maladie. Un soupçon peut survenir, par exemple, si les parents ont déjà donné naissance à un enfant atteint de la maladie et ultrason l'image est remarquable. En cas d'égalité triple plutôt que double, résultant en un signal de couleur triple, le diagnostic est considéré comme confirmé.
Risques, effets secondaires et dangers
Contrairement à la PCR, par exemple, l'hybridation in situ est beaucoup moins sensible à la contamination. De plus, le temps nécessaire à la procédure est considérablement moindre, mais comme les embryons en particulier forment des motifs chromosomiques, aucun motif présent ne peut être utilisé pour déduire avec certitude le reste du chromosome. distribution et donc le statut génétique des autres cellules. Les signaux de couleur peuvent également se chevaucher ou rester invisibles pour d'autres raisons. Ainsi, l'hybridation in situ comme outil de diagnostic lors grossesse est relativement sujet aux erreurs. Des diagnostics erronés peuvent survenir et les parents peuvent décider de ne pas embryon. Pour réduire la tendance à l'erreur de l'hybridation in situ, au moins deux cellules embryonnaires doivent être examinées simultanément. En examinant deux cellules en parallèle, il n'y a plus qu'un risque négligeable d'erreurs de diagnostic. Les parents peuvent donc se fier au diagnostic dans un tel cas. L'hybridation in situ n'est pas proposée à toutes les femmes enceintes, mais uniquement aux femmes d'un groupe à risque. Néanmoins, les femmes enceintes ne se voient pas refuser ce type de diagnostic à leur propre demande. Anormal ultrason des découvertes ou un sérum anormal peuvent inciter un médecin à proposer la procédure de diagnostic. Aujourd'hui, l'hybridation in situ peut être utilisée pour diagnostiquer une grande partie des aberrations chromosomiques, mais en aucun cas toutes. Par conséquent, l'hybridation in situ ne doit jamais être effectuée seule, mais doit toujours être utilisée en conjonction avec un test chromosomique conventionnel. Les soins de la femme enceinte jouent un rôle majeur dans cette procédure. Par conséquent, avant l'analyse, une discussion approfondie sur la méthode de diagnostic a lieu avec la femme enceinte, l'informant des risques, des possibilités et des limites de la technique.
