Le séquençage d'ADN
Dans le séquençage de l'ADN, des méthodes biochimiques sont utilisées pour déterminer la séquence de nucléotides (molécule de base d'ADN avec sucre et phosphate) dans une molécule d'ADN. La méthode la plus largement utilisée est la méthode de terminaison de chaîne Sanger. Puisque l'ADN est composé de quatre bases différentes, quatre approches différentes sont faites.
Chaque approche contient l'ADN à séquencer, une amorce (molécule de départ pour le séquençage), l'ADN polymérase (enzyme qui étend l'ADN) et un mélange des quatre nucléotides requis. Cependant, dans chacune de ces quatre approches, une base différente est chimiquement modifiée de manière à pouvoir être incorporée mais ne fournit pas de point d'action pour l'ADN polymérase. Cela conduit alors à la terminaison de la chaîne. Cette méthode produit des fragments d'ADN de différentes longueurs, qui sont ensuite séparés chimiquement par ce qu'on appelle l'électrophorèse sur gel en fonction de leur longueur. Le tri résultant peut être traduit en séquence de nucléotides dans la section d'ADN séquencée en marquant chaque base avec une couleur fluorescente différente.
Hybridation d'ADN
L'hybridation d'ADN est une méthode de génétique moléculaire utilisée pour prouver la similitude entre deux simples brins d'ADN d'origine différente. Cette méthode utilise le fait qu'un double brin d'ADN est toujours composé de deux simples brins complémentaires. Plus les deux brins simples sont similaires l'un à l'autre, plus les bases forment une connexion solide (liaisons hydrogène) avec la base opposée ou plus il y a de paires de bases formées.
Aucun appariement de bases ne se produira entre les sections sur les deux brins d'ADN qui ont une séquence de bases différente. Le nombre relatif de composés peut maintenant être déterminé en déterminant le point de fusion auquel le double brin d'ADN nouvellement formé est séparé. Plus le point de fusion est élevé, plus les bases complémentaires ont formé des liaisons hydrogène l'une à l'autre et plus les deux simples brins sont similaires. Cette méthode peut également être utilisée pour détecter une séquence de bases spécifique dans un mélange d'ADN. À cette fin, des fragments d'ADN formés artificiellement peuvent être marqués avec un colorant (fluorescent). Ceux-ci servent alors à marquer la séquence de base correspondante et peuvent ainsi la rendre visible.
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